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    病毒的包裝是什么意思它的原理及經驗

    發布日期:2020-06-24 15:37

    病毒的包裝是什么意思它的原理及經驗

    病毒的包裝

    慢病毒(Lentivirus)的包裝是一種逆轉錄病毒,它可以將靶基因引入一些難以轉染的細胞中,例如原代細胞等。 靶基因隨機整合到宿主基因組中,大大提高了轉染效率,可以在細胞系中穩定表達數代,可以篩選出穩定的轉染細胞系。 由于隨機積分,還存在不確定因素。 一些公司還可以提供靶向整合技術,將靶向基因整合到基因組的特定部分,以確保其病毒的包裝表達且不會因隨機整合而對細胞造成傷害。  

    慢病毒表達載體包含包裝,轉染和穩定整合所需的遺傳信息。 慢病毒包裝質粒可以提供轉錄和包裝RNA到重組假病毒載體中所需的所有輔助蛋白。 為了產生高滴度的病毒顆粒,有必要用表達載體和包裝質粒將細胞共轉染,將病毒包裝在細胞中,將包裝的假病毒顆粒分泌到細胞外培養基中,將上清液通過離心獲得,然后可以直接用于宿主細胞感染。  

    慢病毒載體基因組是一種正鏈RNA。 基因組進入細胞后,通過自身的逆轉錄酶逆轉錄成細胞質中的DNA,形成DNA整合前復合體。 進入細胞核后,DNA整合到細胞基因組中。 整合的DNA轉錄mRNA,并將其返回細胞質,表達目的蛋白或產生RNAi干擾。 慢病毒的包裝系統由包裝質粒混合物(Mix)和慢病毒載體質粒組成。  

    通過胰蛋白酶消化收集細胞,將細胞在35mm培養皿中用適當的完全培養基壓平(根據實驗需要選擇培養皿,使細胞占據的面積附著在80%的培養皿上)。 培養皿的總面積%以上)。 將細胞在含有5%CO2的37°C培養箱中孵育8-24小時。 當細胞完全粘附于細胞后,即可開始轉染。 轉染前2h病毒的包裝更換培養基(將舊培養基替換為1.5ml完全培養基)。  

    在我們的實驗室中,我們包裝了VSV-GPF病毒。 首先,將BHK21細胞分散在6孔板中。 達到90%的豐度后,將它們感染痘病毒,提供T7RNA聚合酶,然后用prVSV-GFP主鏈質粒轉染。 表達4種結構蛋白的pBS-NpBS-P,pBS-G,pBS-L輔助質粒。  48小時后,收集上清液,再次感染健康細胞后可見GFP表達。 請諸神,輔助質粒的目的是什么? 由于prVSV-GFP骨架質粒帶有N,P,G和L的四個結構基因,因此尚不為人所知,但是如果沒有輔助質粒則無法包裝病毒。

    有遺傳物質有外殼蛋白,可以引導兩者進入病毒。 腺病毒只能在293A中擴增,而不能在其他細胞中擴增。 慢病毒載體大多被HIV修飾,可以復制野生型慢病毒的包裝載體,但只能在實驗室中使用。 使其具有復制缺陷。 簡而言之,它是替換或刪除與相應功能有關的相應元素。  

    病毒在細胞中進行基因組復制和蛋白質表達,然后自行組裝。 微觀世界中的病毒顆粒很奇怪,并且具有不同的結構。 每種類型的病毒都有其自己的特殊組裝方法。 然而,受科學技術水平的限制,病毒裝配領域的研究工作相對不受歡迎。 如果要實時動態觀察病毒組裝,仍然很難實現。 因此,許多有關病毒的包裝研究仍幾乎是空白。 即使有研究,或者可以確定整個病毒組裝過程,我個人認為可能只有5分之5。  

    分段病毒的包裝,例如流感病毒,布尼亞病毒和虎腸病毒。 這些病毒的基因組是分段的。 如何確保在病毒包裝過程中可以將每個基因組包裝到病毒顆粒中。 以具有三段基因組的布尼亞病毒為例,如果只包裝基因組的兩個片段,會形成病毒顆粒嗎? 但是可以肯定的是,即使可以形成顆粒,病毒仍具有復制缺陷。  

    另一個有趣的現象是“空心包裝”(我自己的名字)現象。 兩天前,我讀了一篇有關塞內卡病毒結構生物學的論文。 塞內卡病毒的包裝屬于小RNA病毒家族,很像口蹄疫病毒。 該論文的作者提到,他們發現細胞中10%的病毒不包含基因組,即所謂的病毒樣顆粒(VLP),或者當包裝病毒時,基因組沒有被封閉,它們被 直接形成的。 完整的蛋白質外殼。 作者在文章中說,這個“空心包裝”現在大象的機制尚不清楚。 讓我用一個易于理解的詞來概括它:盡管該病毒的包裝看起來很嚴密有序,但有時還是會漏掉。  

     

     

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